765.隐蔽、狡猾、善变
765.隐蔽、狡猾、善变 (第2/3页)
2%）上升到第四周超过20%（21.71± 3.22%）（P<0.01）。在我们的LLC 模型中，PMN-MDSCs占总MDSCs 的 94.94 ±8.47%，并且与总MDSCs 具有相同的肿瘤发展趋势（P < 0.05）。对亚群进行分析，虽然M-MDSCs 增加了大约5 倍，但差异没有统计学意义。
为了更好地了解MDSCs 的全身分布，我们还研究了MDSCs 在外周血、脾脏和骨髓中的比例。仅在接种LLC细胞一周后，TB小鼠外周血中的MDSC百分比是无瘤小鼠的两倍(27.33±4.62%vs. 12.48±0.93%， P<0.05)， 3周后的MDSC百分比是无瘤小鼠的5倍(27.33±4.62% vs. 12.48±0.93%，P<0.05)。TB小鼠外周血中PMN-MDSCs的比例也增加，而M-MDSCs的比例与肿瘤大小无关。
PD-L1 是肿瘤细胞、MDSCs、巨噬细胞和树突状细胞表达的最重要的检查点分子之一。为了确定TB 小鼠MDSCs 的 PD-L1 表达是否与健康小鼠不同，我们通过流式细胞术测试了MDSCs 的 PD-L1 表达。结果表明，TME中MDSCs上PD-L1的平均荧光强度（MFI）从在 LLC 细胞接种后的第一周386.8± 100.9 逐渐增加到第四周的1，068.0 ±121.8 （ P <0.01），这表明PD-L1 在我们模型中的MDSC 中具有潜在作用。
在脾脏和骨髓中，随着肿瘤的发展，MDSCs的比例也显著增加，其模式与肿瘤组织和外周血中的MDSCs相同。此外，我们在TB小鼠中观察到明显的脾肿大，这与我们观察到的MDSCs在脾内聚集一致。
为了确定局部照射对肿瘤生长和MDSCs的影响，当肿瘤直径达到7.5 mm时，我们使用大分割RT(20 Gy/F)治疗皮下LLC肿瘤。放疗导致肿瘤进展延迟长达一周，在第7至第10天的最小体积约为500mm 3，但此后肿瘤开始再生。根据放疗前后肿瘤生长曲线，我们选择放疗后第3天为再生前生长，放疗后1周为肿瘤体积最小时为再生开始，放疗后2周和3周为再生阶段。肿瘤组织苏木精-伊红染色显示，与未治疗的肿瘤相比，放疗后的肿瘤中有更多的浸润性炎症细胞。随后的CD11b特异性免疫组化染色显示，大多数炎症细胞是CD11b+髓系细胞，这表明局部照射可能导致MDSCs的积累。为了证实我们的假设，我们在局部照射后的不同时间点对总MDSCs和这两个亚群进行了流式细胞术分析。局部照射后，放疗后肿瘤浸润MDSCs的比例比未治疗肿瘤高2倍(ctrlvs. RT=21.33±3.29% vs. 44.10±3.00%，P<0.001)。PMN-MDSCs与总MDSCs具有相同的增加趋势(ctrlvs. RT=16.37±2.47% vs. 38.66±4.24%，P<0.001)，而M-MDSC比例保持在约0.1%，且与肿瘤大小和治疗无关。外周血情况同肿瘤组织。
为了确定受照射肿瘤中PMN-MDSC 的逐渐积累是否有助于LLC 肿瘤的再生长，或者这种积累是否仅仅是肿瘤生长的结果，使用抗Ly-6G 单克隆抗体来消耗MDSC .抗Ly-6G抗体的应用显着降低了肿瘤部位和外周血中PMN-MDSC的频率（P<0.05）。此外，用抗 Ly-6G 抗体治疗大大延迟了照射后的再生，这表明PMN-MDSC的募集对肿瘤再生至关重要。
虽然PMN-MDSCs利用一系列机制来抑制抗肿瘤免疫反应，这涉及到许多免疫细胞和细胞因子，但对CD8+T细胞的抑制无疑是最重要的。为了确定RT 后 PMN-MDSCs 诱导的免疫抑制是否依赖于CD8 + T 细胞，我们通过流式细胞术评估了CD8 + T 细胞的数量和功能。
如图3D 所示，CD8 + T 细胞的百分比随着照射从11.71± 2.31%下降到2.42 ±0.62%(P<0.01)。PMN-MDSC耗竭逆转了这种下降（ RT + anti-Ly-6G 抗体= 2.42 ±0.62% vs. 20.12 ±3.92%，P<0.01）。为了更好地了解CD8 + T 细胞浸润肿瘤部位的功能状态，我们测量了CD8+ T 细胞内部和表面上IFN-γ、CD28 和 PD-1 的表达。局部 RT 显着降低了 CD8 +T 细胞分泌 IFN-γ的比例，从33.06 4.53%降至13.25 2.08%，并增加了表达 PD-1 的 CD8 + T 细胞的比例（ctrlvs. RT=253.20± 57.03 au vs. 538.80 ±98.76） au，P<0.05）。
CD28 表达未观察到显着变化。当抗Ly-6G抗体被给予辐照
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